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題 名 | 利用聚合酵素連鎖反應鑑定檬果黑斑病菌=Identification of Xanthomonas Campestris Pv. Mangiferaeindicae Using the Polymerase Chain Reaction |
---|---|
作 者 | 黃秀珍; 張治安; 林元春; 朱木貴; 林信成; 徐世典; | 書刊名 | 植物病理學會刊 |
卷 期 | 6:1 1997.03[民86.03] |
頁 次 | 頁1-9 |
分類號 | 435.325 |
關鍵詞 | 檬果黑斑病菌; 核酸探針; 聚合酵素連鎖反應; Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae; DNA probes; Polymerase chain reaction; |
語 文 | 中文(Chinese) |
中文摘要 | 黃秀珍、張治安、林元春、朱木貴、林信成、徐世典. 1997. 利用聚合酵素連鎖 反應鑑定檬果黑斑病菌. 植病會刊 6:1-9. 檬果黑斑病菌 (Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae, 簡稱 XCM)H15 菌株之全量 DNA(total DNA) 經限制酵素 BamHI 處理 後, 與載體 pBluescript SK 接合,再轉型到 E. coli DH10B 菌株,構築一基因庫,由其 中逢機選取之 3 個選殖株 (clones),分別命名為 pXCM58、pXCM24 及 pXCM21, 其插入片 段大小分別為 5.8,2.4,及 2.1 kb。這些選殖株以 random priming 的方式製作以非放射 性物質 Digoxigenin-11-dUTP(DIG) 標識做為核酸探針 (probe) , 並以南方轉漬法 (Southern blotting) 及點漬法 (dot blotting) 分析分離自臺灣不同地區或不同品種檬果 的各供試黑斑病菌株,真菌炭疽病菌及其他植物病原細菌染色體 DNA 之雜合關係。 試驗結 果顯示此三種探針皆可專一性地與黑斑病菌之染色體發生雜合現象, 但 pXCM24 也可與 X. c. pv. vesicatoria 發生微弱雜合訊號。 在聚合酵素連鎖反應 (polymerase chain reaction, 簡稱 PCR) 的研究上, 由 pXCM21、pXCM24、pXCM24 之次選殖株 pXCM24-1 及 pXCM58 之次選殖株 pXCM58-P1 的部份 DNA 序列中分別設計了 4 對引子 P21-3/P21-7、 P24-3/P24-7、P24-3/P24-1-7 及 P58-P1-3/P58-P1-7。 這 4 對引子以 XCM 菌株染色體為 模版時,可專一性的增幅到預期的片段大小分別為 1.9,2.2, 0.9 及 1kb,其偵測率分別 為 82.9 %、 100 %、 94.3 %及 100 %針對偵測性最高的兩對引子 P24-3/P24-7 及 P58-P1-3/P58-P1-7 測試其敏感性,能偵測純化的 DNA 約為 10-100fg,菌量約為 100-500 個細胞。 由以上結果顯示,這 2 對引子在未來於田間檬果黑斑病之診斷上應具有應用潛力 。 |
英文摘要 | Huang, H. C.��, Chang, J. A.��,�� , Lin, Y. C.�� , Chu, M. K.��,��, Lin, H. C. ��, and Hsu, S. T ��. 1997. Identification of Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae using the polymerase chain reaction. Plant Pathol. Bull. 6:1-9. (1. Agricultural Biotechnology Laboratories; 2. Department of Plant Pathology, National Chung Hsing University, Taichung, Taiwan) A genomic library of Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae (XCM) strain HI5 was constructed in the pBluescript SK, and was transformed into E. coli DH10B. Three recombinant clones, designated as pXCM58, pXCM24, and pXCM21 respectively, were randomly selected and labelled by the nonradioactive system with Digoxigenin-11-dUTP (DIG) using the random priming method. In Southern-blot hybridization and dot-blot hybridization analyses, these three probes specifically hybridized to XCM strains but not to other microorganisms including Erwinia carotovora, E. chrysamthemi, Pseudomonas solanacerum, X. c. begoniae, X. c. campestris, X. c. citri, X. c. diffenbachiae, X. c. pruni, X. c. vesicatoria, and Colletotrichum gloeosporioides chromosomes. Four sets of primers, P21-3/P21-7, P24-3/P24-7, P24-3/P24-1-7, and P58-P1-3/P58-P1-7, were generated from the nucleotide sequences of insert DNAs in pXCM21, pXCM24, pXCM24-1 (subcloned from pXCM24) and pXCM58-P1 (subcloned from pXCM58) , respectively. These four primer sets specifically amplify 1.9, 2.2, 0.9 and 1 kb DNA fragments, respectively, using chromosomal DNAs of XCM strains as templates in PCR (polymerase chain reaction) assay; the rate of detection for the four primer sets using 35 strains of XCM were 82.9 %, 100 %, 94.3 % and 100 %, respectively. In sensitivity test, P24-3/P24-7 and minimal number of 100-500 cells. The results indicate that two primer sets, P24-3/P24-7 and P58-P1-3/P58-P1-7 detected the minimal DNA amount of 10-100 fg, and P58-P1-3/P58-P1-7, can be potentially developed to diagnose naturally bacterial black spotinfected fruits using PCR technique. |
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