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題 名 | 牛傳染性鼻氣管炎病毒DNA-尿嘧啶醣甘酵素之生化特性分析=Biochemical Characterization of a Recombinant Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus Uracil-DNA Glycosylase |
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作 者 | 徐維莉; 劉新梧; 鍾楊聰; | 書刊名 | 臺灣畜牧獸醫學會會報 |
卷 期 | 67:1 1997.03[民86.03] |
頁 次 | 頁7-15 |
分類號 | 437.246 |
關鍵詞 | 牛傳染性鼻氣管炎病毒; DNA-尿嘧啶醣甘酵素; 重組型蛋白; Infectious bovine rhinotracheitis virus; Uracil-DNA glycosylase; |
語 文 | 中文(Chinese) |
中文摘要 | DNA-尿嘧啶醣甘酵素(uracil-DNA glycosylase;簡稱UDGase),為啟動DNA修補 路徑 (DNA repair pathway) 的重要酵素之一, 其主要功能在除去被誤崁入 DNA 分子中的 尿嘧啶。 先前我們已將分離自本省雲林地區的牛傳染性鼻氣管炎病毒 (infectious bovine rhinotracheitis virus; IBRV) 之 UDGase 基因選殖出來, 轉嵌入表現載體 (expression vector) 之後送入大腸桿菌 (Escherichia coli) 細胞中進行表現,並經酵素活性測試確認 該分子量為 21-kDa 的重組蛋白 (recombinant protein) 具有 UDGase 之活性。 本篇報告 即針對此 IBRV UDGase 酵素進行系統性生化特性分析。 測試結果顯示,此酵素屬於熱不安 定型蛋白質 (thermolabile protein), 當 10 分鐘前處理的溫度高於 37 ℃時,其活性會 隨著溫度上升而下降。在所測試的酸鹼值範圍內 (pH 6.0-10),此酵素在 pH 8.0 時有最佳 的反應活性。 單價離子如鈉、鉀離子, 分別於濃度高於 60mM 以及 30 mM 時,對 UDGase 酵素具有明顯的抑制作用, 而雙價離子鎂、鈣、錳、鋅離子只要濃度達 10 mM 即可使其活 性喪失殆盡。 此外, 當反應緩衝液中所含螯合物質 (chelating agent) ethylenediaminetetraacetic acid(EDTA) 的濃度高於 10 mM 時, 或添加源自肉毒桿菌 (Bacillus subtilis) 噬菌體 (bacteriophage)PBS 1 之 UDGase 抑制蛋白時均會嚴重影響 及該酵素之活性。 |
英文摘要 | Uracil-DNA glycosylase (UDGase) functions as an antimutator enzyme by removing the misincorporated uracil residue in DNA and initating the DNA repair pathway. Previously, we have cloned the UL2 gene of infectious bovine rhinotracheitis virus (IBRV), which encodes a UDGase, and expressed it in bacteria; the purified 21-kDa recombinant protein (designated UL2B) displayed the UDGase activity in an in vitro assay. In this report, wew turn to investigate biochemical properties of this protein. As our results show, this enzyme is a thermolabile protein. When the temperature of the 10-minute preincubation time was higher than 37 ℃, the activity of the enzyme was dramatically decreased. The enzyme was optimally active at pH 8.0 and it exhibited UDGase activity in the absence of any added metal ion. Addition of sodium chloride, potassium chloride, magnesium chloride, calcium chloride, manganese chloride, or zinc sulfate to the assay mixture caused inhibition. Moreover, the chelating agent ethylenediamine-tetraacetic acid (EDTA), when its concentration was higher than 10 mM, and the uracil glycosylase inhibitor (UGI) of Bacillus subtilis bacteriophage PBS1 both inhibited the activity of the IBRV UDGase. |
本系統中英文摘要資訊取自各篇刊載內容。