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題 名 | A Highly Sensitive and Simple Method of Genomic Subtraction=複雜染色體的差減雜交:一個高靈敏度且簡易的新方法 |
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作 者 | 廖希文; 蔡懷楨; | 書刊名 | 臺灣水產學會刊 |
卷 期 | 26:3 1999.09[民88.09] |
頁 次 | 頁153-159 |
分類號 | 364.21 |
關鍵詞 | 染色體差減雜交; 噬菌體DNA; 吳郭魚; Genomic subtraction; Lambda DNA; Orechromis niloticus; |
語 文 | 英文(English) |
中文摘要 | 分離複雜染色體中少量的特有DNA片段,在分子生物的研究十分重要,然而,目前 的方法不是靈敏度過低,無法分離出微量的特有 DNA 片段, 不然就是步驟繁複,而且分離 出的特有 DNA 片段並不具有高度代表性,所以, 我們發展出一種更新、更有效的方法,具 有高靈敏度,而且操作步驟簡易。 在本研究中, 以加在吳郭魚染色體中 (雙套染色體大於 10 �e bp) 極微量的目標 lambda DNA (總量僅占全部的 1.5 × 10 �笐� ) 為模式進行研 究, 結果顯示只需極少量 (1 ug) 的目標群 DNA(tester DNA) 就可以進行十數次以上的差 減雜交, 使得原本存在於兩個染色體組中的相異 DNA 片段, 所占總比例的增強倍數高達 1.5 × 10 �雁縑A和已知的染色體差減雜交法相比,不僅具有最高的靈敏度,分離出的目標 DNA 也具有高度的代表性,而且操作步驟非常簡單,我們稱它為總量補償染色體的差減雜交 法 (quantity compensation genomic subtraction)。 |
英文摘要 | We describe a method, named quantity compensated genomic subtraction, for isolating rare genomic DNA (gDNA) difference fragments between two complex eukaryotic genomes. Because PCR is used to compensate for quantity after each round of subtraction, up to a dozen iterations are possible with only a small initial amount of target materials (1 ug) after each round of subtraction. We successfully applied this technique to tilapia (Orechromis niloticus) genome (diploid>10 �e bp) mixed with a small amount of lambda DNA, which served as the "difference fragments" target. The magnitude of enrichment was 10 �� and the subtractive products were highly representative. |
本系統中英文摘要資訊取自各篇刊載內容。