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題 名 | Detection of Tamoxifen-DNA Adducts on lacI Genes Using DNA Polymerase Stop Assay=利用DNA Polymerase Stop Assay來偵測lacI基因上Tamoxifen-DNA Adducts之位置 |
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作 者 | 鄭如華; | 書刊名 | 長庚醫學 |
卷 期 | 22:2 1999.06[民88.06] |
頁 次 | 頁189-196 |
分類號 | 418.2216 |
關鍵詞 | 去氧核糖核酸加成物; Tamoxifen; DNA adducts; DNA polymerase stop assay; |
語 文 | 英文(English) |
中文摘要 | 背景:Tamoxifen是目前臨床上用來治療乳癌極熱門的一種藥物。然而,在大白鼠 的研究顯示:tamoxifen 至少可在實驗動物的肝臟中形成 12 種不同的去氧核糖核酸加成物 (DNA adducts) 而後導致肝癌, 並會造成 p53 抑癌基因在第 231 及第 294 密碼處發生突 變。 雖然目前尚未證實 tamoxifen 是否也同樣會在人體中形成去氧核糖核酸加成物,流行 病學的報告已指出 tamoxifen 的使用可能會提高乳癌患者發生子宮內膜癌的機率。 方法: 本研究利用兩種目前公認為最可能在生物體內與去氧核糖核酸形成加成物的兩大系統 (HRP/H �� O �� activated 4-hydroxytamoxifen 及α -acetoxytamoxifen) 來活化進行 tamoxifen 與靶基因 (lacⅠ基因 ) 間之反應。根據 DNA/RNA 聚合�t之行進可能被較大之 去氧核糖核酸加成物所阻礙的現象, 我們希望能找出對 tamoxifen-DNA adducts 最敏感的 一種酵素、並將之發展成 DNA polymerase stop assay, 以找出 tamoxifen 與去氧核糖核 酸反應後所形成之加成物在靶基因上的正確位置。結果:本研究發現 T4 DNA 聚合�t在模板 股上的行進可因 tamoxifen-DNA adducts 之存在而受到抑制。 HRP/H �� O �� activated 4-hydroxytamoxifen 及α-acetoxytamoxifen 兩系統在與 lacⅠ基因反應後所形成的加 成 (adduction) 型式十分類似;大部分的加成物都出現在 guanine residues 上。 特別值 得注意的是, 兩個反應系統均在一處 adenine triplet 位置造成酵素對模板之延長反應 (elongation) 的終止, 其中 HRP/H �� O �� activated 4-hydroxytamoxifen 系統所形成 的終止反應更明顯地較α-acetoxytamoxifen 系統來得強。 結論:現階段的研究已成功地 利用 DNA polymerase stop assay 來定位 tamoxifen 在 lacⅠ基因上所造成的加成物。 為進一步瞭解去氧核糖核酸加成物之形成與人類突變之關係,下一步的研究將包括把 tamoxifen-adducted pcl-neo constructs " 轉殖 (transfect)" 到人類細胞株中;日後若 能在子質體的基因序列上發現 tamoxifen-DNA adducts 會造成特定的突變, 亦或可歸納出 特定的 adduction 熱點 (hotspots) 或突變熱點,此結果將會對瞭解 tamoxifen 之治療與 人類子宮內膜癌間之關係有很大的助益。 |
英文摘要 | Background:Tamoxifen forms DNA adducts in rat liver and causes an increased mutation frequency at the lac Ⅰ genes in the livers of lambda/lac Ⅰ transgenic rats. Although an elevated occurrence of endometrial cancer is found in a small proportion of breast cancer patients treated with tamoxifen, there is conflicting evidence on whether or not low levels of DNA adducts are formed in humans. Methods:Based on the finding that the progression of DNA/RNA polymerases on templates might be blocked by bulky DNA adducts, we successfully developed and used a polymerase stop assay to map the sites of adduct formation in the target lac Ⅰ gene following its reaction in vitro with α -acetoxytamoxifen and horseradish peroxidase/H �烙 �� (HRP/H�烙 �� ) activated 4-hydroxytamoxifen. Results:Using a T4 DNA polymerase stop assay, adduct formation in the lac Ⅰ gene of the plasmid constructs, after the reaction in vitro with α -acetoxytamoxifen and HRP/H �烙 �� activated 4-hydroxytamoxifen, was found to mainly occur with guanines. In particular, one site of adenosine adduction was found on a triplet of adenosines located between two runs of guanines. Conclusion:The success of our development of DNA polymerase stop assay to map the sites of tamoxifen-DNA adducts formation will be very useful for the investigation of the mutagenicity/carcinogenicity of tamoxifen. The mutagenic potential of the tamoxifen adducted bases shall be further examined by transfecting the adducted plasmids into suitable human cell lines. Also, further investigations of the sequence specificity in specific oncogenes and tumor suppressor genes may be useful to explore the relationship between the occurrence of human endometrial cancer and tamoxifen treatment. |
本系統中英文摘要資訊取自各篇刊載內容。