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題名 | 電穿孔法運用於COS-1細胞之基因轉移=Expression of the Hepatitis B Virus Surface Antigen Gene in COS-1 Cells by Electroporation |
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作者 | 吳鴻程; 吳金洌; Wu, Horng Cherng; Wu, Jen-lein; |
期刊 | 中國農業化學會誌 |
出版日期 | 19980600 |
卷期 | 36:3 1998.06[民87.06] |
頁次 | 頁283-292 |
分類號 | 368 |
語文 | chi |
關鍵詞 | 電穿孔法; 基因轉殖; B型肝炎表面抗原; 化學促進劑; COS-1細胞株; DNA組態; Electroporation; Gene transfer; HBsAg; Chemical enhancers; COS-1 cell line; DNA conformation; |
中文摘要 | 本研究以質體 pML-SV2330-HBsAg 之 HBsAg( hepatitis B virus surface antigen, B 型肝炎表面抗原)基因,為測試基因,當質體轉殖到 COS-1 細胞,基因經短暫 表現,可在細胞培養基中,測到基因表現產物 HBsAg 蛋白質。 質體 pML-SV2330-HBsAg 電 穿孔到 COS-1 細胞中,超螺旋型質體 DNA 基因轉移效果是直線型質體 DNA 的 1.3 倍,電 穿孔 DNA 濃度在 50 到 200 μ g/mL 間,細胞培養基中的 HBsAg 含量與 DNA 濃度有正的 相關性存在。 電穿孔前添加 0.5% polyethylene glycol 或電穿孔後將細培養在含有 1.5 × 10 M thymidine 或 1 × 10 M hypoxanthine 的培養基中, 都能增加細胞培養基中 HBsAg 的表現量。 在 COS-1 細胞株中,電穿孔最適條件之參數如下:電壓 10 仟伏特;電 脈時間:100 μ sec;電脈數目:2 �楚F電穿孔時間 12.8 sec;循環次數:7 次。 |
英文摘要 | The hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) gene of pML-SV2330-HBsAg plasmid was transfected to COS-1 cells using the electroporation method. The expression product of the HBsAg gene was detected in the culture medium. The gene transfer efficiency of the supercoiled DNA waa 1.3 folds that of the linear DNA. The amount of gene expression product was proportional to the concentration of plasmid DNA in the range of 50-200 μ g/mL. It was also enhanced by adding 0.5% polyethylene glycol to COS-1 cells before conducting electroporation or adding a chemical enhancer, thymidine (1.5 × 10 M) or hypoxanthine (1 × 10 M), to the culture medium. The optimal operation conditions for the COS-1 cell line using the electroporation method were as follows: electric field = 10 K volts, pulse time = 100 μ sec, number of pulses = 2 ��,burst time = 12.8 sec, and burst cycle = 7. |
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