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題名 | Escherichia coli尿甘二磷酸半乳糖4-差向異構酵素的純化及活性部位之研究 |
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作者姓名(中文) | 洪嘉聰; 蔡正宗; | 書刊名 | 東海學報 |
卷期 | 36:6(農學院) 民84.07 |
頁次 | 頁51-65 |
分類號 | 361.1925 |
關鍵詞 | 尿甘二磷酸半乳糖4-差向異構酵素; 尿甘二磷酸葡萄糖; 尿甘-5-[1-硫二磷酸]葡萄糖; Escherichia coli; UDP-galactose 4-epimerase; UDP[feb6]S-glucose; UDP-glucose; |
語文 | 中文(Chinese) |
中文摘要 | 尿甘二磷酸半乳糖4-差向異構酵素(UDP-galactose 4-epimerase)係純化、分離 自突變種E. coli ATCC 27797。以製備型電泳取代Hydroxylapatite管柱,得純化後酵素之 比活性500unit/mg;純度為290倍,純化過程活性回收率為7%。合成之尿甘-5[1-硫二磷酸] 葡萄糖(UDPαS-glucose),係自然基質尿甘二磷酸葡萄糖(UDP-glucose)的類似物。因 為Pα含硫而具不對稱性,而產生Rp-和Sp-非對映異構物。二異構物能以半製備型μ Bondpak C�琠M磷酸緩衝溶液(50mM pH6.0),經高效率液態層析管柱分離。其純度高,可 運用作為反應基質,以鑑定UDP-galactose 4-epimerase對基質之立體專一性。實驗結果顯 示,epimerase會催化Rp-異構物,而Sp-異構物之反應速率極低,可證實其活化部位與基質 Pα結合的位置,構象很嚴緊,具有高度的立體專一性。 |
英文摘要 | E. coli ATCC27797 UDP-galactose 4-epimerase purified by preparative electrophoresis method rater then hydroxylaptite column showed a specific activity of 500 units per milligram protein, the enzyme purification fold was 290 and the percentage of activity recovery 7%. Synthetic diastereoisomers Rp-and Sp-UDPαS-glucose could be separated by using HPLC semipreparative μBondpak C18 column and 50 mM phosphate buffer, pH 6.0 as elution buffer. The sterospecificity of UDP-galactose 4-epimerase to Rp-UDPαS-Glucose indicated that the epimerase showed a rigid conformation of binding site around the Pα of the substrate. |
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