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題名 | 大豆種皮色素轉移基因GST之選殖與表現分析=Cloning and Characterization of Pigment Transportation Gene--Glutathione S-Transferase (GST) from Soybean Seed Coat |
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作 者 | 黃靖雯; 古新梅; 曾東海; 王強生; | 書刊名 | 作物、環境與生物資訊 |
卷期 | 2:3 民94.09 |
頁次 | 頁221-238 |
分類號 | 434.28 |
關鍵詞 | 種皮; 大豆; 色素基因; 殼胱苷肽轉移酶; Seed coat; Soybean; Pigment gene; Glutathione-S-transferase; GST; |
語文 | 中文(Chinese) |
中文摘要 | 摘要 利用大豆EST 基因庫中穀胱轉移 (glutathione-S-transferase)(GST2,Y10820) 基因序列設計特異核酸引子組,進行逆轉錄 鏈合反應(RT-PCR),獲得GST2 之基因片 段GST420 殖系。經序列分析及基因庫比對 確認後,用以篩選黑色(iRT 基因型)大豆青 仁烏豆(CRWD)種皮之cDNA 基因庫,共得 到二個完整的GST cDNA 殖系GST11-1 (AY382831, 926 bp)與GST70-1(AY382832, 930 bp),分別編碼具有219 個及216 個胺 基酸的蛋白質。由蛋白質結構分析顯示,二 殖系均具有GST 共同之 N 端與C 端 domain 及與glutathione 結合之G-site 等 三個保留區,依特性分類應屬於第三群之 GST 基因。以七個不同I, R, T 基因型組合 之Clark 近同源品系進行南方雜交 (Southern hybridization)結果顯示,在大豆 基因組中GST 基因至多為二套,且未發現 多型性。由北方分析(Northern hybriddization) 結果發現,此二個GST 基因在種 皮的全生育時期及葉部均有表現,但在花及 豆莢組織中並未偵測到基因的表現或是表 現量極低。由於在大豆EST 基因庫中仍有 其他GST 基因相關殖系存在,因此在花瓣 組織中是否另有專一性表現之GST 基因, 扮演花青素轉移之角色仍有待研究。 |
英文摘要 | ABSTRACT Primers specific for GST gene (GST2, Y10820) were synthesized according to the results of soybean EST database search. Expected cDNA fragment GST420 was amplified from total RNA extracted from soybean seed coats of CRWD variety with iRT genotype for experiment. Sequence analysis of GST cDNA fragment confirmed that a partial GST gene fragment was cloned. Two complete cDNA clones, GST11-1 (926 bp, AY382831) and GST70-1 (930 bp, AY382832) of type III GST were obtained by screening the cDNA library with GST420 fragment. The deduced amino acid sequences showed 41-100%identity to ten registered GST proteins by Blast analysis of NCBI. Southern blot analysis indicated that two copies of GST were presented in the genome of Clark isogenic lines with no polymorphism. Northern hybridization showed that these two GST genes expressed in the seed coats and leaves, but not expressed in flowers. Further experiment will be conducted to study the function of GST genes in these tissues. |
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