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題 名 | 鐵炮百合癒傷組織再生系統應用於基因轉殖之研究初報=Preliminary Study of the Establishment of Callus Regeneration Systems and Its Application on Genetic Transformation in Lilium Longiflorum Thunb |
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作 者 | 林學詩; 蔡月夏; 王啟正; | 書刊名 | 花蓮區農業改良場研究彙報 |
卷 期 | 20 2002.12[民91.12] |
頁 次 | 頁45-58 |
分類號 | 435.456 |
關鍵詞 | 鐵炮百合; 花絲培養; 癒傷組織; 基因轉殖; Easter lily; Filament culture; Callus; Genetic transformation; |
語 文 | 中文(Chinese) |
中文摘要 | 為進行鐵炮百合基因轉殖,先行建立癒傷組織再生系統,培養大量具有強再生能力之癒傷組織培植體,以供基因轉殖研究用。在誘導癒傷組織方面,由鐵炮百合自交胚珠培養,獲得一生長活力旺盛的癒傷組織細胞系「LG41」,外觀淡黃色,呈粉末狀或小顆粒狀,在含2,4-D(3.0 mg/l)及BA(0.25 mg/l)的MS培養基上,可不斷產生新的癒傷組織,形成一循環再生系統,移到不含植物生長調節劑的培養基上培養,能再生完整植株。此外,鐵炮百合花絲容易誘導產生癒傷組織,其成功率為91.8%,因此亦適合作為農桿菌基因轉殖試驗用培植體。以農桿菌轉殖法進行試驗,將鐵炮百合幼嫩花絲浸漬帶有GUS和抗hygromycin基因的農桿菌液,進行感染,花絲浸漬的時間為10, 20, 30分鐘三種處理,花絲與農桿菌共培養時間為1, 2, 3日三種處理,分別進行試驗。結果分花絲與農桿菌液浸漬的時間以30分鐘效果較佳,與農桿菌共培養的時間以2日較佳。花絲培養之後產生綠色癒傷組織,在含有40 mg/l hygromycin選擇性培養基上培養,可存活一段時間,但在培養51天之後全部褐化。另以基因槍轉殖法進行試驗,先行純化抽取含GUS及抗hygromycin基因之DNA,包覆在金粒子上,再以Bio-Rad PDS1000/He粒子傳送系統,打進鐵炮百合癒傷組織LG41之細胞內。轉殖後取癒傷組織以組織化學法檢測,結果部份細胞呈藍色反應,顯示已有GUS基因暫時性表達現象。 |
本系統中英文摘要資訊取自各篇刊載內容。