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題 名 | An Enzymatic Microassay for Lactate Concentration in Blood and Hemolymph=藉由微量血液及血淋巴來量測乳酸含量的酵素呈色測定法 |
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作 者 | 林仲彥; 陳淑華; 郭光雄; 郭欽明; | 書刊名 | Acta Zoologica Taiwanica |
卷 期 | 10:2 民88.07 |
頁 次 | 頁91-101 |
分類號 | 383 |
關鍵詞 | 乳酸; 酵素呈色; 乳酸氧化酶; 過氧化氫酶; Lactate; Microassay; Lactate oxidase; Peroxidase; |
語 文 | 英文(English) |
中文摘要 | 乳酸(lactate)是糖類代謝的副產品,特別是在運動後或緊迫環境(stress)下,由於肌肉及血球細胞的代謝作用,會造成血中乳酸的濃度大量增加,若無法及時運送至肝臟中移除作用,將造成乳酸過高而產生乳酸酸血症(lactic acidosis),進而導致生物體產生昏迷、疲乏、局部發炎等現象。所以,若能準確且快速地將血液中乳酸濃度量測出來,將有助於我們了解在緊迫下,碳水化合物的代謝變化,以作為環境生理上的重要指標值。 過去量測乳酸的濃度,乃是利用NAD與lactate dehydrongenase(乳酸去氫?)反應,以分光光度計量測NADH在340nm下的吸光變化量,藉此推算出血中乳酸含量。然而,此一方法不但測定時較長,每次僅能處理一個樣本,同時所使用的藥品亦頗為昂貴,對於須量測大量樣本的環境生理研究來說,這種方式十分不便。 利用化學呈色反應的原理,藉由乳酸氧化?(lactate oxidase)與樣品中的乳酸在96孔微量反應盤(96-well imcroplate)中反應,轉化為兩酮酸(pyruvate)與H2O2(過氧化氫),以其所產生的H2O2(過氧化氫),來驅使竑應溶液中的過氧化氫?(peroxidase)將發光物質呈色,如此只要量測樣本在405nm的吸光值,再配合標準曲線的使用,便能在30分鐘內完成近百個樣品的乳酸量測。此一方式不但精準度高(R2>0.98),量測的範圍更可從1.88到60mg/dl,同時所需的時間(小於30分鐘)、藥品、樣品體積(5μl)與費用,皆少於傳統的量測法及一般商用檢驗試劑,而且藉由酵素的專一性,可以減少其他如蛋白質或其他代謝產物等物質干優量測的可能性,同時因為能於短時間內處理大量樣本,亦可以有效地減樣本中的乳酸的衰減的機率,進一步提高量測的精準度。 |
英文摘要 | Lactic acid, a by-product of carbohydrate metabolism, has often beenused as a physiological indicator for stress. Development of a reliable and efficient methodology for lactate assay on bulk samples was attempted. Using lactate oxidase and peroxidase with the chromogen precursor, ABTS (2, 2’-azino-di-[3-ethylbenzthazoline sulfonate (6)]), to quantify plasma and hemolymph lactate in a citric acid buffer system was found to be a more cost-effective and time-saving method than others currently being used. The assay has been automated for rapid quantification in 96-well microtiter plates. Under optimal assay conditions, the method features a linear determination range from 1.88 to 60 mg/dl lactate, and a reproducibility of 1.01%, as the coefficient of variation, R squared value, is as high as 0.98. The optimal time of reaction for measurements is 30 min, and an adequate sample volume is 5μl. The method developed in this study was proven to be a rapid and reliable assay for lactate quantification. The assay has the advantages of high reproducibility and repeatability for routine processing of bulk samples. |
本系統中英文摘要資訊取自各篇刊載內容。