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題名 | Agrobacterium Tumefaciens-Mediated Transformation of Phalaenopsis Orchid=農桿腫瘤菌在蝴蝶蘭基因轉殖之研究 |
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作者 | 謝瑞旻; 陳文輝; 許宏銘; 林益賢; 蔡媦婷; 傅仰明; 詹明才; 余淑美; Hsieh, R. M.; Chen, W. H.; Hsu, H. M.; Lin, Y. S.; Tsai, W. T.; Fu, Y. M.; Chan, M. T.; Yu, S. M.; |
期刊 | 臺灣糖業研究所研究彙報 |
出版日期 | 19970300 |
卷期 | 155 1997.03[民86.03] |
頁次 | 頁41-54 |
分類號 | 435.432 |
語文 | eng |
關鍵詞 | 蝴蝶蘭; 農桿腫瘤菌; 轉殖體; 附著; Phalaenopsis; Agrobacterium tumefaciens; Transformant; Attachment; |
英文摘要 | 本研究利用農桿腫瘤菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105 (pMT1) 與蝴蝶 蘭擬原球體 (protocorm-like-bodies, PLBs) 進行共培養,建立蝴蝶蘭農桿菌轉殖方法。 試驗中以 NPT II (neomycin phosphotransferase II) 基因與 GUS (β -glucuronidase) 基因分別做為篩選標幟或報導基因。 利用掃瞄式電子顯微鏡 (scanning electron microscope,SEM) 鏡檢,可見許多農悍菌附著在擬原球體表面細胞, 觀察擬原球體切囗增 殖情形時發現,擬原球體切後 l0 天左右,切面上組織之細胞分裂旺盛,適合進行農桿菌接 種感染。 而藉由組織化學染色法觀察球體切面 GUS 基因表現,結果顯示,不同蝴蝶蘭品系 或不同增殖時期球體之反應有所差異。Phal. True Lady 'A76-13' 的擬原球體切後 8 天進 行感染, 有 40% 的擬原球體可獲得 GUS 基因暫時性表現, 切後 10 及 12 天者則約有 50%-80%。 GUS 基因暫時性表現以 Phal. Asian Elegance 'B79-11' 及 Phal. Taisuco Elegance 'F80-13' 切後 10 天者為最高, 其所有擬原球體皆有 GUS 表現。 至於 Phal. Brother Mirage 'A79-69' 於四個品系中感染比率最低,其擬原球體於切後 8 天、10 天及 12 天進行感染, 則分別只有 0 %-17 %、0 % 及 10 % 的擬原球體有 GUS 基因暫時性表現 。將感染後的球體置於含 1OO μ g/ml 康那黴素 (kanamycin) 的增殖培養基中篩選轉殖體 ,存活之擬原球體於 30 天後進行 GUS 活性分析,可獲得呈深藍色之穩定轉殖體。 ating proembryoids of the explant which were selected in regeneration medium containing 100 μ g/ml kanamycin after 30-day culture. |
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