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題名 | 限制性片段長度多型應用於ABO基因型鑑定之探討=Rapid ABO Genotyping by Restriction Fragment Length Polymorphism |
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作者 | 高麗姬; 李俊億; | 書刊名 | 中央警察大學學報 |
卷期 | 38 2001.07[民90.07] |
頁次 | 頁391-431 |
分類號 | 586.662 |
關鍵詞 | ABO基因型鑑定; PCR; RFLP; |
語文 | 中文(Chinese) |
中文摘要 | ABO血型一直是臨床輸血醫學上最重要血型系統之一,自從被引進刑事鑑定上,常被運用於偵查單位查緝重要關係人及特定對象之指標性參考依據。因為每個人都知道自己的ABO血型,但卻不知道自己的DNA型別,經由ABO血型?錄普遍之特性,如果鑑定特定對象的ABO血型,在現今講求辦案時效上,將可大量節省外勤人員之過濾時間及實驗室不必要的DNA鑑定成本。過去以傳統血清學方法鑑驗ABO血型,雖有原理簡單且方法經濟等優點,但於刑事應用上,則常因刑事檢體受到各種因素影響,使得鑑定結果漸受限制。本研究係針對1990年Yamamoto等人所提出ABO基因位cDNA中之二個主要變異區(第六與七個顯譯子之第261與703個核甘酸)上鹼基差異設計引子對,利用PCR複製出之產物,經由簡易的酵素分解步驟,簡化鑑定流程並減少放射性物質污染的危險性,並提高靈敏度及安全性。 本研究主要發現有三:1.靈敏度極高—不論是分別或同時進行PCP-RFLP反應,每次反應只要0.5ng以上DNA模板,即可進行分析ABO基因型;如果外環PCR反應之DNA模板量低於0.5ng以下而無法進行PCP-RFLP者,則可利用巢式PCR反應,進行內環PCP-RFLP,對於外環PCP-RFLP無法偵測者(0.5~□ ng DNA模板所得之PCR產物)所進行內環PCP-RFLP,仍可得到正確的結果。事實上,以此最佳實驗條件已對DNA模板用量減至最低,將利於其他DNA遺傳標記之分析。2.節省DNA模板用量—進行同時PCR-RFLP之分析,只要使用一次的DNA模板用量,即可得知二個主要變異區之鹼基變異,對於微量之刑事物證具有特別意義。3.鑑別力較高—此種PCP-RFLP分析結果,可以得到六個ABO基因型,藉以研判可六之ABO血型,比過去的傳統血清法只能分析出四種血型結果,鑑別力更高。 本研究建議從ABO基因位以外環引子對同時進行PCR複製含有二個變異區,將複製所得之PCR產物,進行RFLP分析,可達到六種不同ABO基因型之圖譜。以同時複製之PCR-RFLP分析為本研究之最佳ABO基因基分析方法。經與ABO表現型比對結果,吻合率高達98.5%(256/260個樣品),本法提供在傳統血清學方法以外,另一個快速、簡便、且正確的輔助方法。 |
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